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蛋白質組學實驗設計、質控與分析

(1) 常用流程

(2) 樣品

(3) iTRAQ/TMT項目設計

體外等重同位素標記定量技術,可同時比較多個樣本之間的蛋白表達量差異(通常10個樣本以下)。

基本原則

(4) Labelfree項目設計

Labelfree是通過比較肽段母離子質譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的表達量差異。該技術無需昂貴的同位素標記做內標。

基本原則

(5)DIA項目設計

DIA是數據非依賴性采集定量技術,它將質譜整個全掃描範圍分為若幹個窗口,高速循環地對每個窗口中的所有離子進行選擇、碎裂及檢測,從而無遺漏、無差異地獲取樣本中所有離子的全部碎片信息。DIA無需指定目標肽段,掃描點數均勻,利用譜圖庫即可實現定性確證和定量離子篩選,並可實現數據回溯。

基本原則

(6)各定量技術比較

從數據采集模式來說,iTRAQ/TMT和Labelfree都是傳統的DDA掃描,即在每個掃描周期內,只采集豐度最高的10-20個母離子信號的子離子碎片,其他信號的子離子信息丟失,因此覆蓋率低、隨機性高、重復性相對低;DIA掃描則在每個掃描周期內,將質量區間設置為多個區段window,每次采集window內所有母離子信息及其碎片(掃描速度足夠快),因此具有高覆蓋度、高重復性的特點。

(7)搜庫軟件

(1)色譜質控

進行蛋白質組學的研究,可從以下角度來分析:

(2)功能層面

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