α—耐高溫澱粉酶 分光光度計法
1 原理：
α-澱粉酶能將澱粉鏈子中的α—1,4葡萄糖苷鍵隨機切斷成長短不壹的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使澱粉對碘呈藍黑色的特異性反應，隨澱粉降解藍色逐漸減褪，漸變成紅棕色，其顏色消失的速度與酶活性有關，故可在標準條件下，通過測定反應後溶液的吸光度計算其酶活力
2 試劑和溶液
1)原碘液：稱取碘化鉀22.0g溶於約300mL水中，加入碘11.0g,在攪拌下使其溶解，然後移入500mL容量瓶中，用水定容，貯於棕色瓶中備用(每月制備壹次)。
2)稀碘液：稱取碘化鉀20.0g溶於300mL水中，準確加入原碘液2.00mL，全部移入500mL容量瓶中，用水定容，貯於棕色瓶中備用(須當天配制)。
3)20g/L可溶性澱粉溶液：稱取可溶性澱粉(以絕幹計)2.000g,精確至0.0001g,用水調成漿狀物，在攪動下緩緩傾入70mL沸水中,然後，以30mL水分幾次沖洗盛澱粉的小燒杯，洗液並入其中,加熱煮沸2min直至完全透明，冷卻至室溫，全部移入100mL容量瓶，用水稀釋至刻線。此溶液必須當天配制。
4)磷酸緩沖液(PH=6.0)：稱取磷酸氫二鈉45.23g、檸檬酸8.07g，用水溶解並定容至1000mL.配好後,用PH計校正。
5)鹽酸溶液c(HCL)=0.1mol/L.
3 儀器和設備：
a）分光光度計 b）恒溫水浴50℃-100℃,精度±0.1℃ c）試管:25mm×200mm d）容量瓶 e）自動吸管 f）秒表
4 待測酶液的制備
液體酶制劑:直接用緩沖溶液配制,使最終濃度控制在65-70u/mL範圍內。
5 測定
1)吸取可溶性澱粉溶液20.0mL和緩沖溶液5.0毫升於試管中，在70℃恒溫水浴中預熱平衡5min。
2)加入稀釋好的待測酶液1.00mL,立即用秒表記錄時間,搖勻,準確反應5min。
3)立即用吸管吸取反應液b)1.00mL,加到預先盛有0.1mol/L鹽酸0.5mL和稀碘液5.00mL的試管中，搖勻。
4)以0.1mol/L鹽酸0.5mL和稀碘液5.00mL的混合液作試劑空白,於660nm波長下，用10mm比色皿迅速測定吸光度(A).根據吸光度查附錄A(標準的附錄),求得測度酶液的濃度(c)。
6 酶活力定義:
在70℃PH6.0的條件下,1分鐘液化1mg可溶性澱粉成為糊精所需要的酶量,即為壹個酶活力單位,以u/mL(u/g)表示。
7 計算: X=c×n×16.67
式中X------樣品的酶活力
c------測試酶的濃度
n------樣品的稀釋倍數
16.67—換算常數
所得結果表示至整數.
8 結果的允許差
平行試驗相對誤差不超過2%。