熒光素酶報告基因系統是以熒光素為底物檢測螢火蟲熒光素酶活性的實驗。熒光素底物在熒光素酶的作用下會發出光(波長540-600nm),光強可以反映熒光素酶的表達。熒光素酶的蛋白表達與啟動子活性、mRNA穩定性和翻譯效率有關。因此,將啟動子、UTR等待測序列與熒光素酶ORF框架融合表達,然後檢測發光強度,就可以判斷這些序列對蛋白質表達的影響。
為了減少實驗誤差,轉染穩定表達腎熒光素酶的質粒作為內參照,催化腔腸素氧化產生藍光(波長460-540 nm)。所以叫雙熒光素酶來報告基因檢測。
2.實驗流程圖
3.服務內容:雙熒光素酶報告檢測啟動子活性服務主要分為以下兩種:
答。?啟動子活性分析,用於檢測待測啟動子是否具有活性及其活性區域;
乙。?啟動子和轉錄因子之間結合的驗證用於研究轉錄因子是否調節基因的待測啟動子及其結合區域。
項目服務內容交付實驗周期的結果由客戶提供。
啟動子活性分析2kb啟動子熒光素酶載體質粒的合成和構建、甘油細菌、測序結果和實驗報告30個工作日1、細胞
2.遺傳信息
截短啟動子熒光素酶載體質粒的構建、甘油細菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測的測試數據和實驗報告
啟動子和轉錄因子結合驗證野生型啟動子熒光素酶載體質粒的合成和構建,甘油菌,測序結果和實驗報告30個工作日【如果!supportLists]1,[endif]單元格
【如果!支持列表]2、[endif]基因和轉錄因子信息
突變啟動子熒光素酶載體質粒的構建、甘油細菌、測序結果和實驗報告
轉錄因子表達載體質粒的構建、甘油細菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測的測試數據和實驗報告
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4.樣品交付要求
A.重組載體:
質粒不少於2ug,或甘油菌約100ul。
B.單元格:
活細胞,2個T25瓶,細胞匯合> 80%(在廣州);或2管冷凍細胞(廣州以外)
備註:載體或細胞可按期構建或購買。
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5.樣品儲存和運輸要求:
A.質粒或甘油細菌可以在冰袋中儲存和運輸;
b .常溫下采集活細胞;
冷凍細胞幹冰的取樣/運輸:我們需要在樣品發送前至少壹天得到通知。