公交車在高速公路上行駛的夜間規定是，下午2點至5點，公交車不得在高速公路上行駛。如果是有固定線路的機場、高鐵快線或者單程運營裏程小於100公裏的短途班車，在保證安全的前提下，淩晨2點至5點不受限制。
詳情如下:
1，根據法律相關規定，客運企業在制定運輸計劃時，應當嚴格遵守客運駕駛員駕駛時間和休息時間的規定；
2.白天連續駕駛時間不得超過4小時，夜間連續駕駛時間不得超過2小時，每次停靠休息時間不得少於20分鐘；
3.24小時內累計駕駛時間不得超過8小時；
4.任何連續7天的累計駕駛時間不得超過44小時，在此期間駕駛員應有效休息；
5、禁止夜間駕駛客運車輛到達安全條件為三級及以下的山區公路；
6、長途客運車輛淩晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸；從事固定線路、高鐵快線和短途班車業務、單程運營裏程小於100公裏的客運車輛的機場，在確保安全的前提下，淩晨2時至5時不受限制。
公路限速標準:
1，行人，非機動車，拖拉機，輪式專用機械車，鉸接式客車。設計時速低於70公裏的全掛貨車等機動車不得進入高速公路；
2.高速公路最高時速不得超過120km，最低時速不得低於60km
3.在高速公路上行駛的小型客車最高時速不得超過120km，其他機動車不得超過100km，摩托車不得超過80km
4.同方向有兩條車道的，左側車道最低時速100公裏，中間車道最低時速90公裏。道路限速標誌指示的速度與上述車道行駛速度的規定不壹致的，應當按照道路限速標誌指示的速度行駛；
5.根據最新的高速公路限速規定，最高限速在原設計速度基礎上提高10-20km/h:設計速度為80km/h的路段，最高限速提高到100km/h；設計速度為100 km/h，最高限速提高到120km/h；隧道的車速限制由每小時60公裏提高至每小時80公裏；
6.大型客車和貨車限速值也相應提高，但同壹路段限速值與小型客車限速值之差不得大於20k m/h；
7.隧道、隧道群限速值壹般為80km/h，事故多發路段限速值壹般比主線低20km/h，急彎、互通匝道限速以設計速度為準；ETC車道限速20km/h，貨車收費車道限速5km/h..同時，除環路限速外，全網限速是基於車型的。
綜上所述，公交車在淩晨2點至5點不能在高速公路上行駛，夜間在道路(高速公路和混合道路)上行駛的客運車輛在淩晨2點至5點必須停放在附近的安全區域；在地面休息時，駕駛員應提醒車上乘客不要隨意走動，保管好隨身攜帶的物品，必要時及時與駕駛員聯系。
法律依據:
《道路客運企業安全管理規範》第三十八條。
客運企業在制定運輸計劃時，應當嚴格遵守客運駕駛員駕駛時間和休息時間的規定:
(壹)連續駕駛時間白天不得超過4小時，夜間不得超過2小時，每次停車休息時間不得少於20分鐘；
(2)24小時內累計駕駛時間不得超過8小時；
(3)在任何連續7天內的累計駕駛時間不得超過44小時，在此期間，司機須有效地在地面上休息。
(四)禁止夜間駕駛客運車輛通過不符合安全通行條件的三級及以下山區道路；
(五)淩晨2時至5時，長途客運車輛停止運行或進行接運；從事固定線路、高鐵快線和短途班車業務、單程運營裏程小於100公裏的客運車輛的機場，在確保安全的前提下，淩晨2時至5時不受限制。
客運企業不得要求客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間駕駛客運車輛。企業應當主動查處客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間的行為，發現客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間駕駛客運車輛時，應當及時采取措施予以糾正。